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          蛋白質免疫印跡中同批次提取蛋白條帶異常分析

          2019-05-21 17:02 admin

          蛋白質免疫印跡實驗是生物醫療方向的科研工作人員經常會做的實驗,然而就是這樣的熱門的實驗,也通常會因為各種各樣的小問題,導致科研人員的頭大。對于一些剛開始進行科研工作的初學者來說,一些細節問題,也會很大的影響實驗進程,甚至產生比較嚴重的后果。今天就帶大家來剖析一下蛋白質免疫印跡中同批次提取蛋白條帶不一致的問題。

                 跑出的條帶不一致的情況有很多,在實驗的每一步都有一定的可能性,比如電泳,轉膜,敷抗體,顯色等等。那么逐步分析下可能存在的問題。

                 一、最重要的點在于上樣量穩定。上樣量穩定是條帶跑出正常的最基礎的因素,如果上樣量不一致,即使后續的操作都沒有問題問題,都會導致跑出的條帶不如我們想象的樣子。建議在操作這一步的時候,更細致一些,重新檢查下上樣量的情況。

                 二、轉膜和敷抗體步驟,是wb實驗中較為關鍵的步驟,可能是敷抗體的時候敷的不均勻。在內參穩定,即上樣量穩定的情況下,建議是再認認真真,仔仔細細做幾遍,很可能重復性就做出來了。

                 三、顯影液環節。有可能是膜沒有淋干凈,上面殘留參差不齊的T/TBS,T/TBS能稀釋顯影液,目的條帶本來表達量就少,某一個點殘留的T/TBS稍微多一點就可能導致顯影效果下降,所以建議在顯影液反應前,盡量將膜上的洗膜液淋掉(當然也不能讓膜干了,要是實驗室富裕的話,也可以多添點顯影液,效果一樣)。

                四、操作流程的細節問題。比如拔梳子時膠錯動,加入樣本后滲入其他孔或漏出。另外,加入樣本時不均勻也可能會產生誤差。還有就是,制膠應保證均勻無氣泡,玻璃板干凈,這樣才能保證結果一致可靠。


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